步骤:
1. 细胞一定要贴在玻片上(最好可以放入24孔板),为后面照像打基础。步骤细胞密度适中,细胞大约60-75%满片即可,免疫否则容易脱片。荧光
2. 取出细胞后用4%多聚甲醛固定15分钟,步骤现用现配。细胞(以下各步骤切毋使玻片干燥)
3. PBS冲洗
4. 0.1%Triton作用20分钟
5. PBS冲洗
6. 10%正常血清封闭10分钟
7. 加入一抗,免疫4度孵育过夜(找个小瓶盖将小玻片支起来,荧光抗体就不容易溢出),还要记住“砸片”,就是抗体从较高处落到片子上,以分布均匀。抗体稀释度1:60,较常用!
8. PBS冲洗4次,各5分钟
9加入荧光二抗,室温30分钟。抗体稀释度1:400,较常用!
10. 同8。
11. 90%甘油封片。也很关键阿,多封几次才有体会。
12. 避光保存,或到显微镜下观察。
细胞免疫荧光,这对很多人来说都是第一次听说这个东西,也不知道他对我们会有什么好处与坏处,科学研究就是这样子的,普通老百姓是不会明白其中的道理的,但是这些研究也是确实的在我们的生活中取得了成果,能够让大家过的更加舒适。
(责任编辑:生活用品)